一種鹵醇脫鹵酶位點特異性標記多功能探針的方法,屬于酶檢測技術領域,本發明通過在目標位點引入琥珀突變,然后通過引入與tRNA/RS表達體系完全正交的非天然氨基酸Naek來標記紅外探針,再利用疊氮與炔烴的SPAAC反應將化學熒光染料標記在酶蛋白上,實現了蛋白質的位點特異性標記紅外探針和熒光探針。本發明的操作流程簡單,有效解決了染料標記異質性的問題,克服了傳統化學標記的缺陷,本方法所嵌入探針標記的鹵醇脫鹵酶具有較好的酶活力(7.73U/mg),保持與野生型鹵醇脫鹵酶相當的熱穩定性和最適反應溫度,表現出較高的紅外吸收值(0.017a.u.)和熒光發射強度(1469a.u.),并且熒光嵌入效率可以達到49.03%,且酶蛋白在點擊反應過后保留60%以上的活性。本發明方法在蛋白質正交標記中具有廣泛的應用前景。
聲明:
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