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篩選鈣激活中性蛋白酶-1抑制劑高通量篩選方法

739   編輯：管理員   來源：中冶有色網  
2023-03-19 07:29:33
本發明發現了一種鈣激活中性蛋白酶-1抑制劑高通量篩選方法，包括以下步驟：(1)鈣激活中性蛋白酶-1抑制劑篩選模型的建立與優化：通過實驗確定鈣激活中性蛋白酶-1最適反應濃度；(2)陽性藥驗證模型可靠性：配制不同濃度的陽性藥，每孔加入5ul；配制2×底物試劑，加樣前加入一定量的Cac12，每孔加入10ul；配制一定量最佳濃度的蛋白酶，每孔加入5ul；室溫反應20分鐘后檢測化學發光，得到不同濃度陽性藥所對應的抑制率，使用作圖軟件求算半數抑制率IC50。本方法使用Suc-LLVY-aminoluciferin化學發光Calpain-1底物，在緩沖體系中對Calpain-1和熒光素酶活性進行優化。加入Calpin-Glo試劑后Calpain-1剪切底物，產生輝光型化學發光信號。在這個均相的酶聯反應體系中，化學發光信號值與酶的活性成比例變化。該方法簡便快捷；化學發光信號強，靈敏度高；分析結果穩定可靠，重現性好。
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聲明：
“篩選鈣激活中性蛋白酶-1抑制劑高通量篩選方法” 該技術專利(論文)所有權利歸屬于技術(論文)所有人。僅供學習研究，如用于商業用途，請聯系該技術所有人。
我是此專利(論文)的發明人(作者)
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