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無抗性標記營養缺陷型魯式酵母的制備方法

1082   編輯：管理員   來源：中冶有色網  
2023-03-19 00:08:19
本發明提供了一種無抗性標記營養缺陷型魯式酵母的制備方法。該技術方案首先分析了魯式酵母的URA表達基因，分別針對其CDS序列的上游片段和下游片段設計引物，以魯式酵母總DNA為模板擴增得到目的片段后，分別與pMD19?T載體連接，再以重組質粒為模板、使用Pfu酶分別擴增，得到上、下游片段。在此基礎上，通過融合PCR手段將上、下游片段連接，從而得到了去除URA基因的CDS區域的敲除載體，基于該同源重組片段，本發明利用pMD19?T載體構建重組質粒，而后通過PEG?醋酸鋰方法轉化野生型菌株，對轉化產物先以限制性培養基初篩，再通過PCR方法直接驗證，最后用含梯度濃度5’?FOA的培養基進一步驗證。本發明所構建的工程菌具有嚴格的URA營養缺陷特征，同時遺傳穩定性良好。
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聲明：
“無抗性標記營養缺陷型魯式酵母的制備方法” 該技術專利(論文)所有權利歸屬于技術(論文)所有人。僅供學習研究，如用于商業用途，請聯系該技術所有人。
我是此專利(論文)的發明人(作者)
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